Special issue for 15 years anniversary of NSMRC

J Clin Med Kaz 2017; 1(43) Suppl 1:28-30

 

УДК616-091

 

CОВРЕМЕННЫЕ МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ ФИБРИЛЛЯРНОГО ГЛОМЕРУЛОНЕФРИТА И АМИЛОИДНОГО НЕФРОЗА

Шаймарданова Г.М.,Федотовских Г.В., Туганбекова С.К., Смагулова А.К.

АО Национальный научный медицинский центр Астана, Казахстан

 

АБСТРАКТ

В статье представлено комплексное морфологическое исследование больных с хроническим гломерулонефритом, были диагностированы заболевания почек с наличием фибриллярных депозитов. При амилоидном нефрозе отложения депозитов были Конго рот положительны и характеризовались электронномикроскопически наличием фибрилл с диаметром около 10 нм. При иммунофлюресцентном исследовании наблюдалось слабое окрашивание lg A, lg G, lg M, тяжелых цепей kappa и комплементов С3 и С1q. Отмечалось диффузное линейное и гранулярное свечение легких цепей lambda и гранулярно линейное свечение fibrinogena. При фибриллярном хроническом гломерулонефрите реакция Конго рот была отрицательна, при этом электронномикроскопически были обнаружены отложения фибрилл диаметром около 12,5 нм и более. При иммунофлюоресцентном исследовании в капиллярах клубочков и интерстиции были обнаружены яркие отложения lg G, легких цепей lambda и менее яркие - lg A, тяжелых цепей kappa и фибриногена. Морфологическое исследование ткани почек больных с хроническим гломерулонефритом и амилоидным нефрозом, имеющими отложения депозитов в виде фибрилл, требует комплексной диагностики с использованием современных методов исследования.

Ключевые слова: фибриллярный гломерулонефрит, амилоидный нефроз, диагностика, фибриллярные отложения депозитов.

 

ВВЕДЕНИЕ

Общеизвестно, что для ряда заболеваний почек, а именно амилоидного нефроза, фибриллярного и иммунотактоидного хронического гломерулонефрита, важным морфологическим признаком накопления полимеризующихся белков, является наличие фибриллярных или трубчатых депозитов. При впервые описанном в 1977 году [1] фибриллярном гломерулонефрите электронномикроскопически были выявлены депозиты, состоящие из хаотически расположенных фибрилл диаметром 10 nm [2]. Данная патология получила название амилоилоидоподобной нефропатии, так как отложения депозитов не воспринимали окраску Конго-рот. Необходимой особенностью диагностики заболеваний почек является комплексное диагностическое светооптическое, иммунофлюоресцентное и электронномикроскопическое исследование. В связи с тем что, фибриллярный гломерулонефрит и иммунотактоидная нефропатия относятся к заболеваниям, диагностируемым только с помощью электронной микроскопии, приобретение в клинике АО ННМЦ электронного микроскопа Libra 120 C.Zeiss позволило использовать его в диагностике довольно редко встречаемой данной патологии.

Цель исследования: улучшение диагностики хронических гломерулонефритов с отложениями фибриллярных депозитов

 

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

Для гистологических и гистохимических исследований ткань почек фиксировалась в 10% растворе нейтрального формалина, затем заливалась в парафин по общепринятой методике. С парафиновых блоков изготавливались срезы толщиной 3-5 мкм, которые окрашивались гематоксилином и эозином, Массон трихромом, Конго рот, PAS и серебром. Иммунофлюоресцентные исследования проводились по общепринятой методике и окрашивались антителами FITC. Микроскопия осуществлялась на светооптических системах Axiostar и Axioskop-40 фирмы С. Zeiss. Для электронномикроскопического исследования биопсийные кусочки ткани почек фиксировали в 2,5 % растворе глютаральдегида с постфиксацией в 1% растворе четырехокиси осмия, проводились по общепринятой методике и заключались в эпон. Полутонкие и ультратонкие срезы готовили на ультрамикротоме Leica. Полутонкие срезы окрашивались метиленовым синим, азуром 2 и основным фуксином (C. Humphrey, F. Pittman, 1974). Ультратонкие срезы контрастировали уранилацетатом и цитратом свинца по Рейнольдсу, исследовали и сохраняли в электронном микроскопе Libra 120 (C. Zeiss).

 

РЕЗУЛЬТАТЫ

При гистологическом исследовании препаратов почек с амилоидным нефрозом определялись клубочки овальной формы и неодинаковой величины. Наблюдалась слабая мезангиальная пролиферация, сосудистые петли трудно просматривались. Во всех клубочках отмечалось отложение белковых масс в стенке сосудов, в капиллярных петлях и в мезангии, лапчатость, увеличение большей части клубочков в размере (рисунок 1). Наблюдалось расширение мочевого пространства, уменьшение в размере, слияние белковых масс с капсулой Шумлянского-Боумэна. В единичных клубочках в мочевом пространстве серозное содержимое, лимфоциты и утолщение капсулы Шумлянского-Боумэна.

 

Рисунок 1 - Отложение белковых масс в стенке сосудов, в капиллярных петлях и в мезангии. Окраска гематоксилином и эозином. Х100

 

В проксимальных и дистальных канальцах признаки белковой гиалиново-капельной дистрофии, атрофии и отека эпителия канальцев. В просвете канальцев определяются белковые массы и эритроциты, базальная мембрана пронизана белковыми массами. Отмечался очаговый умеренный фиброз, выраженная лимфогистиоцитарная инфильтрация межуточной ткани, в интерстиции в большом количестве белковые массы. Наблюдалось утолщение стенки сосудов, в их просвете эритроциты, единичные лимфоциты.

Гистохимическая реакция по Массон трихром была положительной участки кирпично-красного окрашивания располагались в сосудистых петлях клубочков. Белковые массы в клубочках и соединительнотканные волокна окрашены в красно-оранжевый и синий цвет. Базальная мембрана канальцевого эпителия и межуточная ткань окрашены в синий цвет (рисунок 2). Гистохимическая реакция с солями серебра белковые массы окрашены в коричневый и темно-коричневый цвет. Базальный слой канальцевого эпителия и интерстиций темно-коричневого окрашивания. Стенка сосудов темно-коричневого окрашивания. Гистохимическая РАS-реакция участки фуксинового цвета располагаются в сосудистых петлях клубочков, базальная мембрана канальцевого эпителия очагово окрашена в розовый цвет. Гистохимическая реакция с Конго красным на амилоид положительная, отложения белковых масс в клубочках, в строме, в стенке сосудов и на базальной мембране канальцев красновато-оранжевого окрашивания (рисунок 3). При иммунофлюресцентном исследовании наблюдалось слабое окрашивание lg A, lg G, lg M, тяжелых цепей kappa и комплементов С3 и С1q. Отмечалось диффузное линейное и гранулярное свечение легких цепей lambda и гранулярно линейное свечение fibrinogena (рисунок 4).


 

Рисунок 2 - Окрашивание соединительнотканных волокон в клубочке в синий цвет. Окраска Массон-трихром. Х200

 

Рисунок 3 - Окрашивание амилоида в клубочках, в строме и в стенке сосудов. Окраска Конго-рот на амилоид. Х100


 

При электронномикроскопическом исследовании сосудистых клубочков ножки подоцитов частично слитые. Базальная мембрана слегка расширена, в центре и под эндотелием изредка электронно-прозрачная. Просвет капилляров расширен, заполнен хлопьевидными массами. Базальная поверхность эндотелия неровная. Мезангиальное пространство резко расширено и заполнено беспорядочно расположенными бледными короткими и тонкими фибриллами диаметром менее 10 нм (рисунок 5). В эпителии проксимальных канальцев крупные электронно-плотные белковые гранулы. В эпителии дистальных канальцев липидные включения.

 


Рисунок 4 - Отложение lg G в эпителии канальцев. Увеличение 200

Рисунок 5 - Отложение тонких фибрилл диаметром 10 nm (указание стрелкой). Электроннограмма


Гистологическое и гистохимическое исследование при фибриллярном гломерулонефрите показало наличие депозитов в сосудистых петлях клубочков и расщепление базальной мембраны стенки сосудов. В препаратах почки клубочки несколько увеличены в размерах, c умеренно выраженной клеточностью, полнокровием капилляров, единичными соединительнотканными синехиями, отложениями глыбчатых масс между петлями и пучками (рисунок 6). Между сосудистыми петлями клубочков и капсулой Шумлянского-Боумена в мочевом пространстве большое количество жидкостного содержимого, склероз и отек капсулы. Один из клубочков полностью был замещен бесструктурными массами, сморщен. Белковая дистрофия эпителия канальцев, в просвете фрагментированные фибриноподобные массы, единичные эритроциты. В интерстиции прослеживались прослойки соединительной ткани, единичные лимфогистиоцитарные элементы, а также утолщение и набухание стенки сосудов.

Гистохимическая реакция с конго красным на амилоид была отрицательная (рисунок 7). Гистохимическая реакция по Массон трихром была положительная депозиты кирпично-коричневого окрашивания располагались в сосудистых петлях клубочков, а соединительнотканные волокна интерстиция на всем протяжении были светло голубого и синего цвета. Гистохимическая реакция с солями серебра дала светло-коричневое окрашивание базального слоя канальцевого эпителия, мезангиального матрикса клубочков. При гистохимической РАS-реакции выявлены депозиты розового цвета в сосудистых петлях клубочков. При иммунофлюоресцентном исследовании в капиллярах клубочков и интерстиции были обнаружены яркие отложения lg G, легких цепей lambda и менее яркие - lg A, тяжелых цепей kappa и фибриногена (рисунок 8).

 


 

Рисунок 6 - Депозиты располагаются субэпителиально и интрамембранозно в сосудистых петлях клубочков. Окраска гематоксилином и эозином. Х 400

 

Рисунок 7 - Отрицательная окраска на амилоид. Окраска Конго рот. Х 400.


 

При электронномикроскопическом исследовании выявлены фибриллярные депозиты, расположенные субэпителиально и интрамембранозно. Диаметр фибрилл составлял в среднем 12,5 nm (рисунок 9). Ножки подоцитов были сглажены. Комплексное исследование с использованием электронной микроскопии дало возможность диагностировать заболевание - фибриллярный гломерулонефрит.

 


 

Рисунок 8 - Отложение lg G в сосудистых петлях клубочков и на базальной мембране канальцев. Увеличение 200

 

Рисунок 9 - Отложение фибрилл диаметром более 10 nm (указание стрелкой). Электроннограмма


 

ОБСУЖДЕНИЕ

Решающее значение в точной диагностике основных патологических процессов в биоптатах почек имеет комплексное морфологическое исследование с использованием светооптического, гистохимического, иммунофлюоресцентного и электронномикроскопического методов [3]. Особую значимость приобретает оно при диагностике фибриллярного амилоидоподобного хронического гломерулонефрита с отрицательной реакцией на амилоид и депозитами, состоящими из хаотически расположенных фибрилл. Проведенные нами электронномикроскопические исследования подтвердили наличие тонких фибрилл с диаметром около 10 nm и более при фибриллярном гломерулонефрите. Иммунофлюоресцентные исследования соответствовали данным литературы [4] о положительной реакции на иммуноглобулин G и легкие цепи lambda. При амилоидном нефрозе с положительной реакцией на Конго-рот диаметр фибрилл был около 10 nm. При иммунофлюресцентном исследовании наблюдалось слабое окрашивание lg A, lg G, lg M, тяжелых цепей kappa и комплементов С3 и С1q. Отмечалось диффузное линейное и гранулярное свечение легких цепей lambda и гранулярно линейное свечение fibrinogena

 

ВЫВОДЫ

Морфологическое исследование ткани почек больных с хроническим гломерулонефритом и депозитами в виде фибрилл требует комплексной диагностики с использованием гистологического, гистохимического, электронномикроскопического и иммунофлюоресцентного методов исследования.

 

ЛИТЕРАТУРА

1)  Rosenmann E., Eliakim M. Nephrotic syndrome associated with amyloid-like glomerular deposits. Nephron. 1977; 18: 301308.

2)  Fogo A.B., Qureshi N., Horn R.G. Morphologic and clinical features of fibrillary glomerulonephritis versus immunotactoid nephropathy. Am. J. Kidney Dis. 1993; 22: 367377.

3)  Голицына Е.П., Варшавский В.А., Бочарникова А.В., Рехтина И.Г. Фибриллярный гломерулонефрит и иммунотактоидная нефропатия: современный взгляд на патоморфологический субстрат болезни. Архив патологии, 2011, № 3.- С.54-58

4)  Agnes B. Fogo M.D., Arthur H. Cohen M.D., J. Charles Jennette M.D., Jan A. Bruijn M.D., Ph.D., Robert B. Colvin M.D. Fundamentals of Renal Pathology. ISBN: 978-0-387-31126-5 (Print) 978-0-387-31127-2 (Online). 2007; 174-177.

Creative Commons License
This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.